綿羊精液冷凍技術

    精液冷凍保存是人工授精技術的一項重大革新。它解決了精液長期保存的問題，使精液不受時間、地域和種畜生命的限制，極大限度的發揮和提高優良種公羊的利用率，加速品種的育成和改良步伐。同時，對優良種公羊在短期進行后裔測定，保留和恢復某一品種或個體公羊的優秀選精特性，以及在進行血統更新、引種、減低生產成本等方面具有重要意義。 

一、采精 
    用假陰道按常規方法采集精液。采精頻度，一般采用連續采精2天，休息1天。在采精當日可連續采2次）（間隔10-15分鐘）。原精液的活力要求不低于0.8以上。操作規程與常規人工授精相同。

二、稀釋 

（一）冷凍精液稀釋液的配制
 1、顆粒精液的配方
    9-2號液：I液，取10克乳糖加雙重蒸餾水80毫升，鮮脫脂奶20毫升，卵黃20毫升；II液；取I液45毫升，加葡萄糖3克，甘油5毫升。
 2、安瓶精液配方
    葡3-3液：I液，取葡萄糖3克，檸檬酸鈉3克，加雙重蒸溜水至100毫升，取溶液80毫升，加卵黃20毫升；II液，取I液44毫升，加甘油6毫升。
 3、細管精液配方
    取葡3-3液I液94毫升，加甘油6毫升，再加硒60毫克。
    以上各種稀釋液每100毫升另加青霉10萬單位，鏈霉素100毫克。所用的稀釋溶液（卵黃除外）需過濾并在水溶中煮沸消毒，甘油單獨水汽消毒。稀釋液現配現用。

（二）稀釋比例
    最終稀釋比例（精液于稀釋液之比）：顆粒精液為1：1，安瓶精液和細管精液為1：3。

（三）稀釋方法
    顆粒精液及安瓶精液采用兩次稀釋法，細管精液采用一次稀釋法。
    一次稀釋法：按稀釋比例要求，一次稀釋并分裝和封口，裹8層紗布置3-4度冰箱內降溫平衡3小時。
    兩次稀釋法：先以不含甘油的I液將精液稀釋至最終濃度比例的50%，爾后裹8層紗布置3-4度冰瓶或廣口瓶內降溫平衡（顆粒精液為1-2小時，安瓶、細管精液為2-3小時）后，再用與1液等量的含甘油的II液組第二次稀釋。
    精液采出后應盡快稀釋，如使用多只公羊的混合精液，或采精時間過長時，需對先采的精液進行預稀釋（先加少量的稀釋液）每次稀釋都應在等溫下（精液與稀釋液等溫）下完成。

三、分裝與冷凍

（一）分裝封口
     1、在玻璃安瓶或塑料細管上加印精液紡號及冷凍日期等標記。
     2、安瓶精液，經第二次稀釋后的精液，立即在3-4度下進行分裝（1毫升安瓶）和火焰封口。
     3、細管精液：用5毫升注射器，在室溫下分裝于0．25毫細管內，并隨即用塑料珠或聚乙烯醇粉封口。細管精液不宜過滿，封口后中間應保留一定空隙，以防解凍時細管爆裂。

（二）冷凍
    1、顆粒精液
    干冰法：用特制扎孔器或普通玻璃棒在預先攤平，壓實的干冰上戳上排列整齊圓光的小孔（直徑0．4厘米，深2-2．5厘米）再用滴管吸取稀釋混勻的精液，按0．1毫升容量逐穴滴凍，經4-5分鐘即可揀取，存放于液氮中。
    液氮法：先將液氮注入12磅廣口保溫瓶內，隨后放置漂浮冷凍器（系用泡沫塑料及120目銅紗自制而成，直徑15厘米，高3厘米），銅網面保持低于保溫瓶口2-3厘米，以地溫溫度計測試溫度，隨時調節漂浮冷凍器銅網與液氮面的距離（約3厘米），確保銅網面溫度保持在-80C左右，用滴管吸取精液，按每粒0．1毫升滴凍。加蓋停留4分鐘后浸入液氮，用小勺收取。精液分批冷凍，第二批滴凍前，需用干紗布將銅網面擦凈。
      2、安瓶精液
    葡3-3安瓶精液，由直徑25厘米，深20厘米的鋁筒，周圍加5厘米厚保溫材料并固定在特制木箱里的液氮槽和一個直徑18厘米，深3-4厘米帶網眼的漂浮器制成簡易冷凍器，冷凍時，向液氮槽內注入約1升液氮，將約40支安瓶精液平放入漂浮器，置于距液氮面2厘米處，停留7分鐘后浸入注入液氮。

  四、解凍

（一）顆粒精液

    干種法：將顆粒放入來菌小試管中（每試管放1粒），在75C-70水浴中融化至還有綠豆粒大小時，迅速取出置于手心中輕輕擦動，借助于溫度全部融化。

（二）安瓶精液
    1、葡3-3安瓶精液：取安瓶1支，置60度水浴中搖動8秒鐘取出至融化。
    2、細管精液：取細管1支，置70度水浴輕搖8秒鐘取出至全部融化。
       冷凍精液解凍后應隨即輸精。

五、輸精

（一）輸精制度
    1、顆粒精液，采用每日1次試情，3次輸精法。即當日發情母羊于早晚用輸精器多輸精1次，翌日早晨再輸精1次。
    2、安瓶及細管輸精：采用每日1次試情，2次輸精（早、晚間隔7-8小時），直至發情終止。

（二）輸精標準
    1、顆粒精液，解凍后精子活率不低于0．3，輸精量為0．2毫升，每一輸精劑量中，含活精子數不少于0．9億個。
    2、安瓶及細管精液，解凍后精子活率要求在0．35以上。葡3-3安瓶及細管精液輸精量分別為0．3毫升和0．25毫升。每一輸精劑量中含活精子數分別不得少于0．8億個和0．75億個。